CRISPR 기반 체세포 유전자 교정의 Off-target 효과 정량화를 위한 NGS 기반 라이브러리 구축 전략

본 기술은 CRISPR 유전자 편집 시스템 적용 시 발생하는 예상치 못한 비표적 편집(Off-target effect) 현상을 정밀하게 측정하고 최소화하기 위해 개발된 실험적 방법론이다.

측정 및 분석 워크플로우

• 라이브러리 준비: 표적 부위 주변의 잠재적 비표적 부위를 포함하도록 게놈 전 영역에 걸친 특수 프라이머를 사용하여 cDNA 또는 gDNA 라이브러리를 증폭한다.
• NGS 시퀀싱: 준비된 라이브러리를 차세대 염기서열 분석 플랫폼으로 시퀀싱하여 편집 사건의 빈도를 확보한다.
• 정량적 분석: 시퀀싱 데이터에서 원하는 표적 부위와 발견된 모든 잠재적 돌연변이 위치에서의 염기 치환율을 비교 분석하며, 이를 통해 편집 효율 대비 비표적 편집의 상대적 위험도를 산출한다.

이 접근법은 단순히 편집 여부를 확인하는 것을 넘어, 편집 발생 확률을 통계적으로 정량화함으로써 정밀의료 및 안전성 평가 단계에서 필수적인 정보를 제공한다. 유전자 가위 기술의 임상 적용 가능성을 높이는 데 기여한다.